Análisis exhaustivo del perfil de microarrays de lncRNAs y la coexpresión de mRNA-lncRNA en líneas celulales oncogénicas de Cáncer de Cuello Uterino positivas para PVH.

Los m-RNA y IncRNA podrían afectar a varias vías celulares al implicarse en la proliferación inducida por el VPH, explicando las transcripciones de codificación anticipadas en la oncogénesis. Se detectaron un total de 30586 lncRNAs. A partir de los datos de microarrays, se detectaron un total de 26109 transcripciones de codificación, de las cuales 5008, aproximadamente el 19,18% se expresaron diferencialmente en SiHa. En HeLa, 4993 de 26109 (19,12%) mRNAs mostró expresión aberrante, mientras que 1773 ARNm mostraron un cambio de más de 5 veces en HeLa.

La infección oncogénica por VPH regula la expresión de los lncRNA y mRNA del huésped en las células de cáncer cervical en comparación con C-33A (VPH negativo).

Bibliografía:

1. Yang LY, Yi K, Wang HJ, Zhao YQ, Xi MR. Comprehensive analysis of lncRNAs microarray profile and mRNA-lncRNA co-expression in oncogenic HPV-positive cervical cancer cell lines. Oncotarget. 2016;7(31):49917–29.

Estandarización de la técnica de PCR para la genotificación del Virus del Papiloma Humano (VPH) en pacientes atendidad en consulta externa del Hospital BERTHA CALDERÓN ROQUE, Noviembre 2015-FEBRERO 2016.

Tema	ESTANDARIZACIÓN DE LA TÉCNICA DE PCR PARA LA GENOTIPIFICACIÓN DEL VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO (VPH) EN PACIENTES ATENDIDAS EN CONSULTA EXTERNA DEL HOSPITAL BERTHA CALDERÓN ROQUE, NOVIEMBRE 2015-FEBRERO 2016.
Objetivo	Detectar temprana los genotipos de alto riesgo 16, 18 o 33 proporcionando resultados que permitan un tratamiento temprano y evaluación oportuna a las pacientes con Cáncer Cervicouterino asociado al Virus del Papiloma Humano.
Muestra	Células cervicales obtenidas por “escobillado” del cuello uterino de 27 pacientes con Lesión Escamosa Intraepitelial de Bajo Grado (LEIBG), 23 pacientes con Lesión Escamosa Intraepitelial de Alto Grado (LEIAG) y 12 muestras utilizadas como control negativo interno. Utilizando PBS 0.05% como medio de transporte.
Tipos de ADN	ADN viral de VPH 16, 18 y 33.
Genes a amplificar con el tamaño en pares de bases	140 pb para el HPV 16, 140pb para HPV 18 y 141pb para HPV 33.
Extracción  DEL ADN   Lisis: Separación: Purificación:	Se estandarizó a partir del kit comercial QUIAGEN- QIAamp DNA mini kit.
	Descartar el sobrenadante dejando 2ml del sedimento y homogenizar en vortex, agregar 20µl de Proteasa QIAGEN o proteinasa K, 200ul de muestra y 200µl de buffer AL (buffer de lisis).
	Agregar 400ul de Etanol (96-100%) a la muestra y mezclar nuevamente en Vortex. Centrifugar brevemente para remover las gotas del interior de la tapa.
	Centrifugar a 6000xg (8000 rpm) por 1 minuto.
Tipo de PCR Desnaturalización: Hibridación: Elongación:	PCR punto final estandarizada
	95° por 1min (45 ciclos)
	56° primer 16 y 18-57° primer 33 por 1 min.
	72° por 1min
Visualización  por electroforesis	Electroforesis en gel de agarosa al 1.5-2.0%, con buffer TBE 1X. Tiempo/ Voltaje: 1 hora 20 minutos a 120 voltios.
Sensibilidad y especificidad	Se realizó una PCR punto final estandarizada con: 100% de sensibilidad y 100% de especificidad, reproducibilidad y repetibilidad de 100% y una eficacia diagnóstica del 100%.

Bibliografía:

·    Felipe MoncadaLicenciatura en Microbiología, L., Cristiana Paola Cabezas Robelo Br KeniaLizeth García Rosales Tutora, B., Martha Xiomara Guerrero Msc Cienciasfarmacéuticas, M. D., Bioánalisis clínico Asesor, L., Oscar Arbizú Medina MscMicrobiología, M., & Bioánalisis clínico, L. (2016). UNIVERSIDADNACIONAL AUTÓNOMA DE NICARAGUA, MANAGUA UNAN-Managua Instituto Politécnico dela Salud. Obtenido de: http://repositorio.unan.edu.ni/8634/1/98410.pdf

Prueba de Tamizaje y Confirmatoria de Cáncer Cervicouterino.

Tamizaje: Prueba molecular basada en detección del ADN del VPH.

Detecta el ADN con una sensibilidad (95-99%); consiste en utilizar un cepillo (cytobrush), y un tubo colector (1ml), se toma la muestra del cuello uterino suavemente. Se refrigera entre 4 y 8° para posteriormente enviar a un laboratorio para su análisis bajo el microscopio. 

Confirmación diagnóstica: 

Utilización de ácido acético al 5 % y visión bajo colposcopio y el índice de Reid, permiten detectar lesiones negativas y positivas y no satisfactorias. El epitelio displásico se torna blanco y puede ser detectado fácilmente. La especificidad de 90-98% y sensibilidad de 20-84%.

Bibliografía:

·         Naranjo, I., Rea, D., Rubio, J., Romero, L.,Sañaicela Jessica, Vallejo, J., … Zabala, A. (2017). TEST de virus papilomahumano como método de screening primario para el diagnóstico de neoplasias decérvix uterino. La Ciencia Al Servicio de La Salud, 8(1), 14.Retrieved from http://revistas.espoch.edu.ec/index.php/cssn/article/view/8/8

·       Nava, S. (2013). INTRODUCCIÓN Certeza diagnóstica dela colposcopia, citología e histología de las lesiones intraepiteliales delcérvix ARTÍCULO ORIGINAL. Rev Invest Med Sur Mex, 20(2), 95–99.

·         Terrazas, S., Ibáñez, C., Lagos, M., Poggi, H.,Brañes, J., Barriga, M. I., … Ferreccio, C. (2015). Examen de detección devirus papiloma humano en el tamizaje de cancer cervicouterino en un Servicio deSalud de Santiago, Chile. Revista Medica de Chile, 143(1), 56–62.doi:10.4067/s0034-98872015000100007

·           Zamora-Julca, Roxana Elizabeth; Ybaseta-Medina, Jorge& Palomino-Herencia, A. (2019). RELACIÓN ENTRE CITOLOGÍA, BIOPSIA YCOLPOSCOPÍA EN CÁNCER CÉRVICO UTERINO. Rev Méd Panacea, 8(1), 31–45.Retrieved fromhttps://revistas.unica.edu.pe/index.php/panacea/article/view/13/13

Alteraciones en la Epigenética del Cáncer Cervix Uterino

Dos de las principales oncoproteínas virales, E6 y E7 y la pérdida de E2, están relacionadas en la interacción del virus del Papiloma Humano y la célula inducendo cambios epigenéticos en las células infectadas. El proceso de integracion del genoma VPH principalmente su región temprana (E) E6 y E7 codifican proteínas importantes para la transformación neoplásica e inactivan funcionalmente los productos de dos genes supresores de tumores muy importantes, el gen p53 y Rb,respectivamente provocando proliferación y transformación maligna de las células infectadas.

Esta investigación se realizó mediante: kit “High Pure PCR Template Preparation Kit” de Roche

                                                        Fuente: (Arteaga-Núñez, 2015)

Bibliografía:

·   Fernanda Nozar, M., & Briozzo, L. (2017).Cervical cancer in Uruguay. Controversies in prevention. Revista Médica DelUruguay, 33(1). Retrieved fromhttp://www.scielo.edu.uy/scielo.php?pid=S1688-03902017000100142&script=sci_arttext&tlng=en

·      Villafuerte, J., Yoel, R., Guerra, H., Elisa, Z.,Reina, A., Naranjo, L., & José, H. (2019). Aspectos bioquímicos y factoresde riesgo asociados con el cáncer cervicouterino Biochemical Aspects and RiskFactors Associated with Cervical. Revista Finlay, 9(2), 138–146.Retrieved from http://www.revfinlay.sld.cu/index.php/finlay/article/view/635

·  Arteaga-Núñez, J. & et. a. (2015). DETECCIÓN MOLECULAR DE REGIONES ONCOGÉNICAS E6 Y E7 DE VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO MEDIANTE PCR EN PACIENTES PAPANICOLAOU NEGATIVO DEL INSTITUTO REGIONAL DE ENFERMEDADES NEOPLÁSICAS DE LA LIBERTAD. SCIÉNDO, 17(2). Retrieved from http://revistas.unitru.edu.pe/index.php/SCIENDO/article/view/1046/974